摘要：目的对乳香中乳香酸类成分提取纯化工艺进行优选。方法采用UPLC-TQ/MS检测，以乳香中13个乳香酸（3-羰基甘遂-8,24-二烯-21-酸、3α-乙酰甘遂-7,24-二烯-21-酸、3-羟基甘遂烷-8,24-二烯-21-酸、乙酰11α-甲氧基-β-乳香酸、3α-羟基甘燧烷-7,24-二烯-21-酸、11-酮基乳香酸、3-O-乙酰基-α-乳香酸、3α-乙酰氧基-羊毛甾-8,24-二烯-21-酸、3β-乙酰氧基-5α-8,24-羊毛甾二烯-21-酸、3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、3-乙酰基甲氧基甘遂-8,24-二烯-21-羧酸、α-乳香酸、β-乳香酸）的提取量及浸膏得率为评价指标，通过单因素及响应曲面法考察提取方法、提取溶剂、料液比、提取时间及提取次数对乳香提取工艺的影响；采用碱溶酸沉法纯化乳香提取物，并对纯化工艺参数进行单因素和正交试验考察，确定最佳纯化工艺。结果以95%乙醇20倍量回流提取4次，每次62min为最佳提取工艺；以碱液pH为12～13溶解，在0～4℃用酸液pH＜2酸沉30min为最佳纯化工艺，乳香酸类成分纯度可达73.87%。结论此优选的提取纯化工艺稳定可行，适用于乳香有效成分的提取纯化，为其物质基础研究提供科学依据。
乳香Olibanum为橄榄科植物乳香树BoswelliacarteriiBirdw.及同属植物B.bhaw-dajianaBirdw.树皮渗出的树脂，分为索马里乳香和埃塞俄比亚乳香。乳香辛温香窜，善透窍以理气，能于血中行气、舒筋活络、消肿止痛，以行气活血为主[1]，且具有治疗骨关节炎、类风湿性关节炎、风湿、跌打损伤等药效[2]。临床上乳香也常与没药相须为用，具有活血化瘀、消肿生肌之功效[3]。目前已报道的乳香中的乳香酸类成分主要有五环三萜类、四环三萜类、大环二萜类等，研究表明乳香酸类化合物在抗炎、抗肿瘤等方面发挥着重要作用[4-8]。
本研究在前期工作[9-13]基础上，通过UPLC-TQ/MS联用技术对乳香中的乳香酸类成分进行含量测定，以13种乳香酸类化合物为评价指标，采用单因素实验及响应曲面法优选乳香中乳香酸的最佳提取工艺，同时利用碱溶酸沉对其进行纯化，以期提高乳香酸的提取率，为乳香的物质基础研究提供科学依据。
1仪器与试药
1.1仪器
WatersAcqmityUPLC系统（包括四元泵溶剂系统，在线脱气机和自动进样器）、Xevo质谱检测器、MassLynx4.1质谱工作站软件，美国Waters公司；KQ-E型超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司；AnkeGL-16GII型离心机，上海安亭科学仪器厂；EPED超纯水系统，南京易普达易科技发展有限公司；SartoriusBTD电子天平，赛多利斯科学仪器有限公司；戴生高速万能粉碎机，永康市九顺莹商贸有限公司。
1.2试剂与材料
超纯水经易普易达超纯水制备系统自制；乙腈为色谱纯，购自德国默克公司；乙醇、甲醇、盐酸、NaOH、Na2CO3、NaHCO3等化学试剂均为分析纯，购自南京良纬生物科技有限公司。
1.3药品
乳香批号，产自广西，购自苏州市天灵中药饮片公司。炮制方法为醋制，经南京中医药大学段金廒教授鉴定，本品为橄榄科植物乳香BoswelliacarteriiBirdw.树皮渗出的树脂。
乳香酸对照品3-羰基甘遂-8,24-二烯-21-酸（1，批号，质量分数≥98%）、3α-乙酰甘遂-7,24-二烯-21-酸（2，批号，质量分数≥98%）、乙酰11α-甲氧基-β-乳香酸（4，批号，质量分数≥98%）、3α-羟基甘燧烷-7,24-二烯-21-酸（5，批号，质量分数≥98%）、11-酮基乳香酸（6，批号，质量分数≥98%）、3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸（10，批号，质量分数≥98%），均购自南京良纬生物科技有限公司；乳香酸对照品3-羟基甘遂烷-8,24-二烯-21-酸（3，批号，质量分数≥95%）、3-O-乙酰基-α-乳香酸（7，批号，质量分数≥98%）、3α-乙酰氧基-羊毛甾-8,24-二烯-21-酸（8，批号，质量分数≥98%）、3β-乙酰氧基-5α-8,24-羊毛甾二烯-21-酸（9，批号，质量分数≥98%）、α-乳香酸（12，批号，质量分数≥95%）、β-乳香酸（13，批号，质量分数≥98%），均购自宝鸡辰光生物科技有限公司；乳香酸对照品3-乙酰基甲氧基甘遂-8,24-二烯-21-羧酸（11），质量分数≥95%，实验室自制。
2方法与结果
2.1乳香中乳香酸类成分含量测定
2.1.1供试品溶液制备取药材粉末约5g，精密称定，按照不同提取因素及纯化因素提取后，补足减少的质量，混匀，取提取液适量，滤过，r/min离心10min，取上清液，经0.22μm微孔滤膜滤过，稀释20倍，即得供试品溶液。
2.1.2混合对照品溶液制备精密称定乳香酸对照品适量，用甲醇溶解，配制成1mg/mL的单一对照品溶液，分别取一定量的单一对照品溶液于10mL量瓶中，并用甲醇定容至刻度，制成混合对照品溶液，其中含1～13分别为52.4、34.0、40.8、36.5、38.8、41.6、53.2、44.0、25.9、47.2、34.0、41.2、50.4μg/mL。
2.1.3UPLC-TQ/MS分析条件
（1）色谱条件：AcquityUPLCBEHC18色谱柱（mm×2.1mm，1.7μm）；柱温30℃；体积流量0.4mL/min；进样量2μL；流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱：0～1min，90%乙腈；1～3min，91%乙腈；3～9min，92%乙腈；9～12min，95%乙腈；12～14min，90%乙腈；14～15min，90%乙腈。
（2）质谱条件：采用电喷雾正、负离子源（ESI+/ESI?），多反应检测（MRM方式），氦气体积流量35arb，辅助气体积流量15arb，毛细管温度℃，喷雾电压3.5kV，管透镜电压水平65%，毛细管电压35V，扫描范围m/z～0。二级质谱分析：裂解模式：高能诱导解离（HCD）；隔离宽度2.0（m/z）；归一化碰撞能量35V；激活时间30ms；碰撞气为高纯氮气。主要质谱检测参数见表1，混合对照品及样品提取离子流色谱图见图1。
2.1.4线性关系考察取混合对照品溶液，分别稀释2、4、10、20、40、、、、0倍，经0.22μm微孔滤膜滤过，依次进样分析，以峰面积积分值为纵坐标（Y），对照品的质量浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，计算回归方程，结果分别为1Y＝.1X＋.30，r＝0.，线性范围0.～2.μg/mL；2Y＝.6X－.19，r＝0.，线性范围0.～8.μg/mL；3Y＝.5X＋80.，r＝0.，线性范围0.～20.μg/mL；4Y＝89.X＋41.，r＝0.，线性范围0.～18.μg/mL；5Y＝.34X＋52.，r＝0.，线性范围0.～19.μg/mL；6Y＝X＋.1，r＝0.，线性范围0.～20.μg/mL；7Y＝27.X＋31.，r＝0.，线性范围0.～53.μg/mL；8Y＝.2X－.74，r＝0.，线性范围0.～4.μg/mL；9Y＝.4X＋.67，r＝0.，线性范围0.～6.μg/mL；10Y＝.3X－.16，r＝0.，线性范围1.～26.μg/mL；11Y＝.3X＋.21，r＝0.，线性范围0.～3.μg/mL；12Y＝.4X＋13.，r＝0.，线性范围0.～4.μg/mL；13Y＝.1X＋.52，r＝0.，线性范围0.～5.μg/mL。
2.1.5精密度试验取混合对照品溶液，连续进样6次，记录各对照品色谱峰。结果见表2，各主要色谱峰峰面积的RSD均小于5.1%，表明仪器精密度良好。
2.1.6重复性试验按“2.1.1”项下方法，平行制备6份乳香供试品溶液，依次进样测定，记录样品中各待测物色谱峰峰面积，计算含量。结果见表2，各含量的RSD均小于4.7%，表明方法重复性良好。
2.1.7稳定性试验取供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h进样测定，记录各标准品色谱峰。结果见表2，各含量的RSD均小于5.8%，表明供试品溶液在24h内化学性质稳定。
2.1.8加样回收率试验取乳香样品6份，精密加入与样品中各成分等量的对照品，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，进样测定并计算各指标成分的回收率。结果见表2，各指标成分的平均加样回收率为84.3%～.1%，RSD为1.6%～4.1%。
2.1.9样品测定方法取药材粉末约5g，精密称定，按照“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1.3”项下色谱条件测定各指标成分含量，计算其提取率，提取率＝提取液中指标成分含量×提取液体积/药材质量。
取1mL药液于离心管中，离心管质量为A，离心浓缩得干浸膏后质量为B，样品总体积为V，生药量为M，则干浸膏得率＝(B－A)V/M。
2.2乳香酸有效部位提取工艺单因素考察研究
以各指标成分提取率以及干浸膏得率为考察指标，单因素考察提取方法、提取溶剂、料液比、提取时间、提取次数对乳香酸类成分提取率和干浸膏得率的影响。
2.2.1提取方法考察
（1）超声提取：取药材粉末约5g，精密称定，以料液比为1∶8，95%乙醇超声（W，50kHz）提取1次，提取时间为1h，测定指标成分含量，平行3份，取平均值。
（2）乙醇回流提取：取药材粉末约5g，精密称定，以料液比为1∶8，95%乙醇回流提取1次，提取时间为1h，测定指标成分含量，平行3份，取平均值。
（3）水煎煮：取药材粉末约5g，精密称定，以料液比为1∶8，水煎煮1次，提取时间为1h，测定指标成分含量，平行3份，取平均值。
提取方法考察结果见表3。结果表明，乙醇回流法较超声法效果好，故选择乙醇回流提取法。
2.2.2提取溶剂乙醇体积分数考察取药材粉末约5g，精密称定，以料液比为1∶8，乙醇（20%、40%、60%、80%、95%）回流提取1次，提取时间为1h，平行制备3份，测定指标成分含量和干浸膏得率，取平均值，结果见表4。表明乳香酸在95%乙醇时溶出较多，且干浸膏得率较80%乙醇变化不大，故选择95%乙醇作为提取溶剂。
2.2.3料液比的考察取药材粉末约5g，精密称定，以95%乙醇回流提取1次，提取时间为1h，考察不同料液比1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶15，平行制备3份，测定指标成分含量和干浸膏得率，取平均值，结果见表5。在料液比1∶15时乳香酸含量和干浸膏得率最高，故料液比选择1∶15。
2.2.4提取时间的考察取药材粉末约5g，精密称定，以料液比为1∶8，95%乙醇回流提取1次，考察不同提取时间1.0、1.5、2.0、2.5、3.0h，平行制备3份，测定指标成分含量和干浸膏得率，取平均值，结果见表6。表明乳香酸随提取时间变化不大，在1.5h时乳香酸总量最高，故提取时间选择1.5h。
2.2.5提取次数的考察取药材粉末约5g，精密称定，以料液比为1∶8，95%乙醇回流提取，提取时间为1h，考察提取次数1、2、3、4次，平行制备3份，测定指标成分含量和干浸膏得率，取平均值，结果见表7。表明乳香酸在提取4次时乳香酸总量最高，故选择提取次数为4次。
故以测定13种乳香酸类成分提取率和干浸膏得率为考察依据，结果用15倍量的95%乙醇回流提取4次，每次1.5h。
2.3乳香酸有效部位提取工艺Box-Behnken响应曲面实验
2.3.1响应面实验设计及结果应用DesignExpert8.0.6软件进行响应面设计，在单因素试验的基础上，以乳香中乳香酸类成分提取率为响应值，利用Box-Behnken响应面法设计提取溶剂乙醇体积分数（A）、料液比（B）、提取时间（C）、提取次数（D）4因素3水平（?1、0、+1）共29组试验，考察因素水平、试验设计及结果见表8。
2.3.2模型的建立及其显著性检验利用DesignExpert8.0.6软件对表8试验数据进行多元回归拟合，得到提取率对提取溶剂乙醇体积分数（A）、料液比（B）、提取时间（C）、提取次数（D）的2次多项回归模型为提取率＝26.54＋1.49A＋6.64B－2.30C＋7.10D－2.32AB－1.05AC＋1.07AD＋2.25BC＋4.17BD－2.34CD＋1.04A2＋3.00B2＋0.22C2＋0.76D2。
对所得模型进行显著性检验，结果见表9。可以看出，该回归模型的P值＜0.，表明该回归方程模型高度显著；失拟项P＝0.88＞0.，表明失拟不显著。模型的相关系数（r2）为0.，调整确定系数（radj2）为0.，说明该模型能解释71.80%响应值的变化，即该模型与实际试验拟合程度良好，用该模型分析和预测乳香的提取是合适的。且回归模型中1次项A、C不显著，B、D均显著；2次项均显著；交互项AB、AC、AD、BC、CD不显著，BD显著。说明不同的提取工艺与乳香提取率之间不是简单的线性关系。
另外从F值可看出，单因素对提取的影响顺序为D＞B＞C＞A，即提取次数＞料液比＞提取时间＞提取溶剂乙醇体积分数。
2.3.3响应面分析通过DesignExpert8.0.6软件对各因素之间的交互作用进行响应面分析，绘制响应面曲线图，响应曲面陡峭程度越大，则对提取率影响也越大。结果见图2。
2.3.4最佳工艺的确定通过DesignExpert8.0.6软件分析，得到乙醇回流提取乳香中乳香酸类成分最佳工艺条件为93.33%乙醇，料液比为1∶20，提取时间为1.03h，提取次数为4次。在该条件下乳香酸类成分理论总量为52.31mg/g，说明利用Box-Behnken建立的模型是合理的。考虑到实际操作的可行性，将工艺条件改为95%乙醇，料液比为1∶20，提取时间为调整为62min，提取次数为4次进行验证，重复3次，乳香酸类成分总量分别为45.64、45.37、46.13mg/g，RSD为0.84%，见表10，说明该模型得到的结果可靠。
2.4乳香酸有效部位纯化工艺参数优化
2.4.1碱溶条件考察
（1）碱性溶液选择：实验中常用的碱性溶液为碳酸钠、氢氧化钠、碳酸氢钠溶液，拟定1%碳酸钠溶液、1%氢氧化钠溶液、1%碳酸氢钠溶液，根据溶解度和溶液碱性以及溶解后颜色变化选择。实验过程中发现1%碳酸氢钠基本不溶解乳香浸膏，1%氢氧化钠碱性过高，溶解后颜色偏深，故选择了1%碳酸钠溶液。
（2）超声溶解：取乳香干浸膏约1g，精密称定，加1%碳酸钠溶液调节pH值为11～12，超声（W，50kHz）溶解30min，滤过，取滤液在常温条件下加5%盐酸溶液调节pH值为2～4进行酸沉，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分含量，计算纯化产物中乳香酸类成分总质量分数和纯化产物得率。
总质量分数＝纯化产物中指标成分总量/纯化产物质量
纯化产物得率＝纯化产物质量/干浸膏质量
（3）常温溶解：取乳香干浸膏约1g，精密称定，加1%碳酸钠溶液调节pH值为11～12，常温放置30min，滤过，取滤液在常温条件下加5%盐酸溶液调节pH值为2～4进行酸沉，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分含量。
（4）加热至60℃溶解：取乳香干浸膏约1g，精密称定，加1%碳酸钠溶液调节pH值为11～12，加热至60℃溶解30min，滤过，取滤液在常温条件下加5%盐酸溶液调节pH值为2～4进行酸沉，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分含量。
碱溶条件考察结果见表11。综合纯化产物中乳香酸类成分的总质量分数和纯化产物得率，且实验过程中发现常温和加热至60℃不能完全溶解，故选择超声溶解法。
2.4.2碱液pH值考察
（1）碱液pH11～12溶解：取乳香干浸膏约1g，精密称定，加1%碳酸钠溶液调节pH值为11～12，超声（W，50kHz）溶解30min，滤过，取滤液在常温条件下加5%盐酸溶液调节pH值为2～4进行酸沉，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分含量。
（2）碱液pH12～13溶解：取乳香干浸膏约1g，精密称定，加1%碳酸钠溶液调节pH值为12～13，超声（W，50kHz）溶解30min，滤过，取滤液在常温条件下加5%盐酸溶液调节pH值为2～4进行酸沉，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分含量。
（3）碱液pH13～14溶解：取乳香浸膏约1g，精密称定，加1%氢氧化钠溶液调节pH值为13～14，超声（W，50kHz）溶解30min，滤过，取滤液在常温条件下加5%盐酸溶液调节pH值为2～4进行酸沉，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分含量。
碱液pH值考察结果见表12。综合纯化产物中乳香酸类成分的总质量分数和纯化产物得率，故选择pH为11～12的碱液溶解。
2.4.3酸沉条件考察
（1）常温酸沉30min：取乳香干浸膏约1g，精密称定，加1%碳酸钠溶液调节pH值为11～12，超声（W，50kHz）溶解30min，滤过，取滤液在常温条件下加5%盐酸溶液调节pH值为2～4酸沉30min，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分含量。
（2）0～4℃酸沉30min：取乳香干浸膏约1g，精密称定，加1%碳酸钠溶液调节pH值为11～12，超声（W，50kHz）溶解30min，滤过，取滤液加5%盐酸溶液调节pH值为2～4进行酸沉，在0～4℃条件下酸沉30min，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分含量。
（3）常温酸沉15min＋0～4℃酸沉15min：取乳香干浸膏约1g，精密称定，加1%碳酸钠溶液调节pH值为11～12，超声（W，50kHz）溶解30min，滤过，取滤液加5%盐酸溶液调节pH值为2～4进行常温酸沉15min后再0～4℃酸沉15min，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分含量。
酸沉条件考察结果见表13，综合纯化产物中乳香酸类成分的总质量分数和纯化产物得率，故选择0～4℃酸沉。
2.4.4酸液pH值考察
（1）酸液pH＜2：取乳香干浸膏约1g，精密称定，加1%碳酸钠溶液调节pH值为11～12，超声（W，50kHz）溶解30min，滤过，取滤液在常温条件下加5%盐酸溶液调节pH＜2进行酸沉，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分含量。
（2）酸液pH2～4：取乳香干浸膏约1g，精密称定，加1%碳酸钠溶液调节pH值为11～12，超声（W，50kHz）溶解30min，滤过，取滤液在常温条件下加5%盐酸溶液调节pH值为2～4进行酸沉，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分的量。
（3）酸液pH4～6：取乳香干浸膏约1g，精密称定，加1%碳酸钠溶液调节pH值为11～12，超声（W，50kHz）溶解30min，滤过，取滤液在常温条件下加5%盐酸溶液调节pH值为4～6进行酸沉，析出沉淀，滤过，水洗至中性，取滤渣干燥，得纯化产物，粉碎，取适量纯化产物用甲醇溶解，测定指标成分的量。
酸液pH值考察结果见表14。综合纯化产物中乳香酸类成分的总质量分数和纯化产物得率，故选择酸液pH值为2～4进行酸沉。
2.5乳香酸纯化工艺正交试验
2.5.1正交试验设计及结果在乳香酸纯化单因素试验的基础上，采用正交试验考察碱液pH值、酸液pH值、酸沉条件。根据正交设计助手软件，以碱液pH值（A）、酸液pH值（B）、酸沉条件（C）作为3个考察因素，分别选取3个水平进行正交试验，利用极差分析及方差分析，以确定最佳纯化工艺条件。正交试验因素水平、设计及结果见表15。
2.5.2模拟方差分析及最佳工艺的确定对正交试验所得的结果进行方差分析，试验方差分析结果见表16。影响乳香中乳香酸类成分的总质量分数的各因素主次关系为B＞A＞C，即酸液pH＞碱液pH＞酸沉条件。经方差分析，各因素对乳香中乳香酸类成分的总质量分数无显著影响（P＞0.05）。由此可得最佳纯化工艺为A2B1C3。综合考虑大生产实际操作的可能性及经济性，采用A2B1C2，即碱液pH值为12～13、酸液pH＜2、酸沉条件为0～4℃静置30min。用此工艺进行验证，重复3次，3组试验纯化的乳香酸类成分总质量分数分别为70.82%、68.32%、70.05%，RSD为1.84%，这说明该纯化条件稳定可靠。
3讨论
乳香作为中医临床常用的中药，乳香酸是其主要的活性成分，乳香酸因其紫外吸收差，不适用一般的分析仪器；UPLC-TQ/MS联用技术具有灵敏度高、分离效果好且定量准确的特点，适用于无紫外吸收的化合物的定量测定，故选择UPLC-TQ/MS联用技术对乳香酸类成分进行含量测定。通过测定乳香中13个乳香酸类成分，对乳香中乳香酸类成分的提取纯化工艺进行了系统研究，以期获得高纯度的乳香酸类成分。对乳香酸类成分进行富集以及提取工艺优化研究，可为其生物活性和作用机制研究奠定基础。
目前提取工艺研究的方法主要有超临界CO2萃取法、水蒸气蒸馏法、亚临界流体萃取法、微波提取法等，而响应曲面法是一种稳定可靠、应用范围较广的统计方法，通过考察各因素之间的交互作用减少实验次数，可高效地优选出最佳条件。近年来该方法已经被广泛应用于中药有效成分的提取工艺优化[14-16]。故本实验采用单因素实验优选乳香的提取方法，作为响应曲面试验的因素水平；通过Box-Behnken响应曲面法考察提取溶剂、料液比、提取时间及提取次数对乳香提取工艺的影响，筛选最佳提取工艺。结果发现，采用95%乙醇回流提取62min，提取次数为4次，料液比为1∶20时乳香酸总提取率为45.37%，干浸膏得率为56.78%。提示，采用最佳的提取条件可最大限度的将乳香中的有效成分提取完全，从而减少药材浪费，发挥其临床适应症的疗效。
乳香具有多种药理活性，且主要与其乳香酸类成分和挥发油等有关。研究发现11-酮基-乳香酸衍生物可以诱导乳腺癌和宫颈癌细胞凋亡[17]。四环三萜和五环三萜类的乳香酸可作为微粒体前列腺素E2合酶-1的抑制剂，发挥抗炎作用[18]。乳香挥发油可促进透皮吸收，具有促血流[19]等作用。乳香水提取物通过调节TRPV1减轻小鼠的神经痛[20]。本研究旨在对乳香酸类成分富集工艺的研究，由于乳香酸显酸性，故选择碱溶酸沉的方法纯化，该方法简便易行[21]。
通过单因素优选碱液pH值、酸液pH值与酸沉条件确定正交试验的因素水平，从而获得最佳纯化工艺参数。结果发现，当碱液pH值为12～13、酸液pH值＜2、酸沉条件为0～4℃、静置30min时乳香酸的质量分数高达73.87%。表明采用碱溶酸沉的方法对乳香酸进行纯化是可行的。
本研究采用UPLC-TQ/MS联用技术同时测定乳香中13个乳香酸类成分的含量，结合干浸膏的得率综合评价乳香酸的提取纯化工艺，可为乳香的综合利用提供依据，但其生物活性仍需进行深入研究。
参考文献（略）来源：缪晓冬，汤书婉，宿树兰，尚尔鑫，钱大玮，段金廒.基于响应曲面法的乳香有效部位提取纯化工艺优化研究[J].中草药,,51（5）:-.预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇